實時熒光定量PCR（qPCR）是一種高效、精確、敏感、快速的分子生物學(xué)方法，可以用于檢測和量化DNA或RNA目標(biāo)序列。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、醫(yī)學(xué)診斷、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。這是一種基于熒光定量檢測的PCR技術(shù)。其基本原理是：通過引物特異性地引導(dǎo)DNA或RNA模板的擴(kuò)增，同時結(jié)合熒光探針的發(fā)光信號，實時檢測擴(kuò)增反應(yīng)過程中靶標(biāo)的數(shù)量變化。熒光信號的強(qiáng)度與靶標(biāo)序列的數(shù)量成正比。此外，PCR系統(tǒng)還可實現(xiàn)多種熒光染料的多通道檢測，增強(qiáng)試劑盒的多功能性能。

　　

　　實時熒光定量PCR系統(tǒng)的操作流程簡單而靈活。主要包括以下步驟：1）樣品制備；2）引物和熒光探針設(shè)計；3）PCR反應(yīng)設(shè)置和擴(kuò)增條件優(yōu)化；4）實時熒光測量和數(shù)據(jù)分析。在測量過程中，系統(tǒng)可以記錄熒光信號的變化，并以熒光信號來生成實時擴(kuò)增曲線。通過對擴(kuò)增曲線的分析，可以得出靶標(biāo)序列的絕對定量結(jié)果。此外，在熒光定量檢測過程中，應(yīng)注意防止DNA或RNA樣本的污染和交叉污染，以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。

　　

　　實時熒光定量PCR系統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中，如基因表達(dá)分析、病原體檢測、疾病診斷、藥物篩選等領(lǐng)域。以下是系統(tǒng)在生物醫(yī)學(xué)研究中的具體應(yīng)用：

　　

　　1、基因表達(dá)分析：可以定量檢測各種基因的表達(dá)水平，從而探究基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、發(fā)現(xiàn)新的生物學(xué)功能或者新的治療靶點。

　　

　　2、病原體檢測：可以檢測各種病原體的DNA或RNA序列，包括病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲等，可以快速、準(zhǔn)確地診斷疾病。

　　

　　3、疾病診斷：可以用于一些常見疾病的檢測與診斷，如心血管疾病、癌癥、自身免疫性疾病等等。

　　

　　4、藥物篩選：可以用于藥物篩選，通過檢測藥物對特定基因的調(diào)節(jié)效應(yīng)，評估藥物的治療效果和安全性。

　　

　　與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相比，實時熒光定量PCR系統(tǒng)具有以下明顯的優(yōu)勢：

　　

　　1、高靈敏度和特異性，可以檢測到極低濃度的靶標(biāo)序列。

　　

　　2、高通量和快速檢測，可以同時檢測多個靶標(biāo)序列，并在短時間內(nèi)得出結(jié)果。

　　

　　3、熒光信號直接反映了靶標(biāo)數(shù)量，無需進(jìn)行后續(xù)電泳分析，節(jié)約了時間和成本。

　　

　　4、準(zhǔn)確度高，可得到絕對定量結(jié)果，并且操作簡單，適用范圍廣。